(一)溶劑分離法:一般是將總提取物,選用三、四種不同極性的溶劑,由低極性到高極性分步進行提取分離。水浸膏或乙醇浸膏常常為膠伏物,難以均勻分散在低極性溶劑中,故不能提取完全,利用中草藥化學(xué)成分,在不同極性溶劑中的溶解度進行分離純化,是zui常用的方法。
廣而言之,自中草藥提取溶液中加入另一種溶劑,析出其中某種或某些成分,或析出其雜質(zhì),也是一種溶劑分離的方法。中草藥的水提液中常含有樹膠、粘液質(zhì)、蛋白質(zhì)、糊化淀粉等,可以加入一定量的乙醇,使這些不溶于乙醇的成分自溶液中沉淀析出,而達到與其它成分分離的目的。例如自中草藥提取液中除去這些雜質(zhì),或自白及水提取液中獲得白及膠,可采用加乙醇沉淀法;自新鮮括樓根汁中制取天花粉素,可滴人丙酮使分次沉淀析出。目前,提取多糖及多肽類化合物,多采用水溶解、濃縮、加乙醇或丙酮析出的辦法。
此外,也可利用其某些成分能在酸或堿中溶解,又在加堿或加酸變更溶液的pH后,成不溶物而析出以達到分離。例如內(nèi)酯類化合物不溶于水,但遇堿開環(huán)生成羧酸鹽溶于水,再加酸酸化,又重新形成內(nèi)酯環(huán)從溶液中析出,從而與其它雜質(zhì)分離;生物堿一般不溶于水,遇酸生成生物堿鹽而溶于水,再加堿堿化,又重新生成游離生物堿。這些化合物可以利用與水不相混溶的有機溶劑進行萃取分離。一般中草藥總提取物用酸水、堿水先后處理,可以分為三部分:溶于酸水的為堿性成分(如生物堿),溶于堿水的為酸性成分(如有機酸),酸、堿均不溶的為中性成分(如甾醇)。還可利用不同酸、堿度進一步分離,如酸性化臺物可以分為強酸性、弱酸性和酷熱酚性三種,它們分別溶于碳酸氫鈉、碳酸鈉和氫氧化鈉,借此可進行分離。有些總生物堿,如長春花生物堿、石蒜生物堿,可利用不同rH值進行分離。但有些特殊情況,如酚性生物堿紫董定堿(corydine)在氫氧化鈉溶液中仍能為乙醚抽出,蝙蝠葛堿(dauricins)在乙醚溶液中能為氫氧化鈉溶液抽出,而溶于氯仿溶液中則不能被氫氧化鈉溶液抽出;有些生物堿的鹽類,如四氫掌葉防己堿鹽酸鹽在水溶液中仍能為氯仿抽出。這些性質(zhì)均有助于各化合物的分離純化。
(二)兩相溶劑萃取法:兩相溶劑提取又簡稱萃取法,是利用混合物中各成分在兩種互不相溶的溶劑中分配系數(shù)的不同而達到分離的方法。萃取時如果各成分在兩相溶劑中分配系數(shù)相差越大,則分離效率越高、
(三)沉淀法:是在中草藥提取液中加入某些試劑使產(chǎn)生沉淀,以獲得有效成分或除去雜質(zhì)的方法。
(四)鹽析法:鹽析法是在中草藥的水提液中、加入無機鹽至一定濃度,或達到飽和狀態(tài),可使某些成分在水中的溶解度降低沉淀析出,而與水溶性大的雜質(zhì)分離。
(五)透析法:透析法是利用小分子物質(zhì)在溶液中可通過半透膜,而大分子物質(zhì)不能通過半透膜的性質(zhì),達到分離的方法。
(六)結(jié)晶、重結(jié)晶和分步結(jié)晶法:鑒定中草藥化學(xué)成分,研究其化學(xué)結(jié)構(gòu),必須首先將中草藥成分制備成單體純品。在常溫下,物質(zhì)本身性質(zhì)是液體的化臺物,可分別用分餾法或?qū)游龇ㄟM行分離精制。一般他說,中草藥化學(xué)成分在常溫下多半是固體的物質(zhì),都具有結(jié)晶他的通性,可以根據(jù)溶解度的不同用結(jié)晶法來達到分離精制的目的。研究中草藥化學(xué)成分時,一旦獲得結(jié)晶,就能有效地進一步精制成為單體純品。純化臺物的結(jié)晶有一定的熔點和結(jié)晶學(xué)的特征,有利于鑒定。如果鑒定的物質(zhì)不是單體純品,不但不能得出正確的結(jié)論,還會造成工作上的浪費。因此,求得結(jié)晶并制備成單體純品,就成為鑒定中草藥成分、研究其分子結(jié)構(gòu)重要的一步。